40. ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỌC GEL ĐỂ TINH SẠCH PROTEIN TRONG DUNG DỊCH CÓ NỒNG ĐỘ MUỐI CAO

Abstract

Mục tiêu: Tối ưu hóa quy trình sắc ký lọc gel để tách chiết và tinh sạch protein từ các dung dịch có nồng độ muối cao, nhằm định lượng chính xác protein trong mẫu sinh học phức tạp.

Phương pháp: Nghiên cứu thực nghiệm sử dụng mẫu chuẩn Bovine Serum Albumin(BSA) (30-120 mg/L) và mẫu thực tế. Các điều kiện được khảo sát bao gồm loại cột, nồng độ đệm phosphate, tốc độ dòng và thể tích bơm mẫu. Protein và muối được theo dõi lần lượt bằng detector UV (280 nm) và detector độ dẫn điện. Hiệu suất thu hồi và độ tinh sạch được đánh giá thông qua định lượng nitơ tổng số và điện di SDS-PAGE.

Kết quả: Điều kiện tối ưu được xác định là cột Sephadex G-25, đệm phosphate 150 mM (pH 7), tốc độ dòng 3 mL/phút, thể tích tiêm mẫu 2 mL. Ở điều kiện này, protein được tách hoàn toàn khỏi muối với hiệu suất thu hồi >95%. Đường chuẩn định lượng cho thấy tính tuyến tính cao (R² = 0,9998). Phương pháp này cho kết quả tương đương với phương pháp Kjeldahl nhưng nhanh hơn và đơn giản hơn.

Kết luận: Phương pháp sắc ký lọc gel với các thông số tối ưu là một công cụ hiệu quả và đáng tin cậy để khử muối, tinh sạch và định lượng protein trong các mẫu sinh học phức tạp có nồng độ muối cao.