26. XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP MULTIPLEX-PCR CHẨN ĐOÁN PHÂN BIỆT HAI LOÀI HETARAKIS GALLINARUM VÀ HISTOMONAS MELEAGRIDIS
Nội dung chính của bài viết
Tóm tắt
Mục tiêu: "Nghiên cứu này nhằm phát triển phương pháp multiplex-PCR để chẩn đoán và phân biệt đồng thời hai loài Heterakis gallinarum và Histomonas meleagridis cùng tồn tại trong đường ruột của gà.".
Phương pháp: Tiến hành tách chiết mẫu mô ruột và manh tràng để thu nhận DNA tổng số; thiết kế các cặp mồi đặc hiệu riêng cho từng loài dựa trên trình tự gen 18S ribosome. Trên cơ sở đó, xây dựng và thử nghiệm phương pháp multiplex-PCR nhằm chẩn đoán và phát hiện đồng thời hai loài Heterakis gallinarum và Histomonas meleagridis.
Kết quả: Cả hai cặp mồi sử dụng trong phản ứng được thiết kế để khuếch đại vùng gen 18S ribosome. Cụ thể, cặp mồi HGF-HGR tạo sản phẩm PCR có kích thước 712 bp, đặc hiệu riêng cho loài H. gallinarum, trong khi cặp mồi HMF-HMR tạo sản phẩm PCR có kích thước 331 bp, đặc hiệu riêng cho loài H. meleagridis. Kết quả thử nghiệm phản ứng multiplex-PCR khi sử dụng đồng thời hai cặp mồi trên cho phép phát hiện hai loài H. gallinarum và H. meleagridis với các kích thước chênh lệch nhau và ngưỡng phát hiện mẫu bệnh phẩm với hàm lượng DNA tổng số từ 0,78 ng trở lên đều cho kết quả multiplex-PCR đạt chất lượng tốt.
Kết luận: Cặp mồi HMF-HMR được thiết kế đặc hiệu cho loài H. meleagridis, trong khi cặp mồi HGF-HGR đặc hiệu cho loài H. gallinarum. Thử nghiệm phản ứng multiplex-PCR trên các mẫu đơn khuôn, đa khuôn, hoặc các khuôn từ các loài giun tròn khác nhau đều không ghi nhận phản ứng bắt cặp sai mồi.
Chi tiết bài viết
Từ khóa
Heterakis gallinarum, Histomonas meleagridis, multiplex-PCR, 18S rRNA
Tài liệu tham khảo
[2]. Lê Văn Năm. Bệnh đầu đen ở gà và gà tây. Tạp chí Khoa học Công nghệ Chăn nuôi. 2011;32:88-91.
[3]. Graybill HW, Smith T. Production of fatal blackhead in turkeys by feeding embryonated eggs of Heterakis papillosa. J Exp Med. 1920;31(5):647–55. doi: 10.1084/jem.31.5.647.
[4]. Hauck R, Hafez HM. Experimental infections with the protozoan parasite Histomonas meleagridis: a review. Parasitol Res. 2013;112:19–34. doi: 10.1007/s00436-012-3190-5.
[5]. Farr MM. Further observations on survival of the protozoan parasite, Histomonas meleagridis, and eggs of poultry nematodes in feces of infected birds. Cornell Vet. 1961;51:3-13. PMID: 13698259.
[6]. Beckmann JF, Dormitorio T, Oladipupo SO, Bethonico Terra MT, Lawrence K, Macklin KS, Hauck R. Heterakis gallinarum and Histomonas meleagridis DNA persists in chicken houses years after depopulation. Vet Parasitol. 2021;298:109536. doi: 10.1016/j.vetpar.2021.109536.
[7]. Clark S, Kimminau E. Critical review: future control of blackhead disease (histomoniasis) in poultry. Avian Dis. 2017;61:281–8. doi: 10.1637/11593-012517-ReviewR.
[8]. Liebhart D, Windisch M, Hess M. Oral vaccination of 1-day-old turkeys with in vitro attenuated Histomonas meleagridis protects against histomonosis and has no negative effect on performance. Avian Pathol. 2010;39:399–403. doi: 10.1080/03079457.2010.506906.
[9]. Kitade Y, Ootsuka S, Iitsuka O, Saga N. Effect of DMSO on PCR of Porphyra yezoensis (Rhodophyta) gene. J Appl Phycol. 2003;15:555–7.
[10]. Hauck R, Balczulat S, Hafez HM. Detection of DNA of Histomonas meleagridis and Tetratrichomonas gallinarum in German poultry flocks between 2004 and 2008. Avian Dis. 2010;54:1021–5.