43. KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN BIỂU HIỆN MONOAMIN OXIDASE B NGƯỜI TRÊN PICHIA PASTORIS (Tạp chí Y học Cộng đồng, 2026)
Mục tiêu: Khảo sát và xác định các điều kiện tối ưu cho việc biểu hiện enzyme monoamine oxidase B (MAO-B) người tái tổ hợp trên Pichia pastoris KM71.Phương pháp nghiên cứu: Chủng P. pastoris KM71 mang gen mã hóa MAO-B người được sử dụng. Các điều kiện nuôi cấy và cảm ứng được khảo sát bao gồm các loại môi trường tăng sinh khối (BMG, BMGY), môi trường cảm ứng (BMM, BMMY), nồng độ methanol (0,25%, 0,5%, 1%) và thời gian cảm ứng (24 - 144 giờ). Điều kiện phá tế bào bằng phương pháp cơ học với hạt thủy tinh cũng được tối ưu hóa. MAO-B được tinh chế bằng sắc ký trao đổi ion (HiTrap Q FF) và hoạt tính được xác định bằng phương pháp đo quang với cơ chất benzylamin.Kết quả: Môi trường tối thiểu BMG - BMM cho hoạt tính enzyme cao hơn môi trường phức hợp BMGY - BMMY. Nồng độ methanol 0,5% và thời gian cảm ứng 24 giờ cho hoạt tính MAO-B cao nhất. Điều kiện phá tế bào tối ưu là 6 phút phá, 10 phút nghỉ, trong 6 chu kỳ. MAO-B được tinh chế thành công, rửa giải chủ yếu ở nồng độ 30% và 40% HIGH-QB và enzyme tinh chế có hoạt tính khoảng 2977 U/L.Kết luận: Nghiên cứu đã biểu hiện thành công enzyme MAO-B người tái tổ hợp có hoạt tính trên chủng P. pastoris KM71 và xác định được các điều kiện tối ưu cho quá trình biểu hiện, phá tế bào và tinh chế bước đầu, tạo tiền đề cho các ứng dụng tiếp theo.
Keywords: Monoamin oxidase B người; Pichia pastoris; tái tổ hợp.