XÂY DỰNG VÀ BƯỚC ĐẦU THẨM ĐỊNH XÉT NGHIỆM ASO REAL-TIME PCR SỬ DỤNG SYBR GREEN PHÁT HIỆN BIẾN THỂ RS55886062 TRÊN GEN DPYD

Đặt vấn đề: Biến thể rs55886062 (DPYD*13) làm giảm hoạt tính dihydropyrimidine dehydrogenase (DPD), làm tăng nguy cơ độc tính nặng do fluoropyrimidin. Mục tiêu: Xây dựng và bước đầu thẩm định quy trình ASO real-time PCR sử dụng SYBR Green phát hiện rs55886062. Đối tượng và phương pháp: Nghiên cứu thực nghiệm trên 23 mẫu DNA từ máu toàn phần người khỏe mạnh. Plasmid chứng đại diện cho ba kiểu gen T/T, T/G và G/G được xây dựng, xác nhận bằng giải trình tự Sanger và sử dụng để tối ưu hóa quy trình. Quy trình được bước đầu thẩm định dựa trên hiệu suất khuếch đại, ΔCt và đối chiếu với giải trình tự Sanger. Kết quả: Xây dựng thành công plasmid chứng mang alen T và G. Điều kiện tối ưu gồm thể tích phản ứng 10 µL, nồng độ mồi 0,2 µM và nhiệt độ bắt cặp 60°C. Quy trình phân biệt được các kiểu gen với |ΔCt| ≥5,0 ở đồng hợp và |ΔCt| <5,0 ở dị hợp; hiệu suất khuếch đại 90–110%, R² ≥0,99. Kết quả kiểu gen T/T ở 23 mẫu DNA bộ gen người phù hợp 100% với giải trình tự Sanger. Kết luận: Đã xây dựng và bước đầu thẩm định quy trình ASO real-time PCR sử dụng SYBR Green phát hiện rs55886062.