45. ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG CỦA TẾ BÀO CAR-T NHẬN BIẾT PROTEIN CD19 ĐỂ ĐIỀU TRỊ BỆNH BẠCH CẦU LYMPHO CẤP
Nội dung chính của bài viết
Tóm tắt
Mục tiêu: Nghiên cứu tiến hành đánh giá chất lượng của tế bào CAR-T in vitro trong ứng dụng liệu pháp tế bào CAR-T điều trị bệnh bạch cầu lympho cấp.
Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Tế bào CAR-T CD19RCD137/pMC và CAR-T CD19RCD137- iCasp9-IL15/pMC được nuôi cấy để xác định tính vô trùng. Kiểm tra sản phẩm mẫu dịch tế bào đạt tiêu chuẩn về giới hạn nội độc tố. Sau đó tách chiết protein bằng kỹ thuật điện di SDS page và westen blotting. Dựng đường chuẩn albumin và định lượng protein E. coli bằng hệ thống phân tích Western Blot. Đánh giá biểu hiện của mRNA E. coli bằng kỹ thuật real-time PCR.
Kết quả: Giới hạn phát hiện nội độc tố: 0,005-0,5 EU/ml, nồng độ nội độc tố < 0,045 EU/ml. Tế bào CAR-T đảm bảo vô trùng. Xây dựng đường chuẩn với 1 ml dịch nuôi có chứa 352,585 µg protein. Trọng lượng khối cặn protein tổng số trong 1 ml dịch nuôi là 1,15 mg, lượng protein tổng số chiếm 3,3 %. Tỉ lệ protein E. coli có trong mẫu dịch nuôi cấy tế bào CAR-T là 0,06-0,21%. Mẫu dịch nuôi cấy tế bào CAR-T tại các thời điểm ngày 3, 7 và 14 không biểu hiện E. coli.
Kết luận: Kết quả cấy khuẩn, định lượng nội độc tố endotoxin và protein E. coli cho thấy sản phẩm tế bào CAR-T đáp ứng chất lượng.